PCR dijagnostika - analiza infekcije


Lančana reakcija polimeraze (PCR) - vrlo precizna metoda molekularne genetske dijagnostike, koja omogućuje osobi za otkrivanje raznih zaraznih i nasljedne bolesti, akutni i kronični stadij i davno prije bolest može manifestirati.

Lančana reakcija polimeraze (PCR) 1983. godine razvili Myullisa Cary (SAD), za koji je 1993. dobio je Nobelovu nagradu za kemiju.

PCR analiza za većinu infekcije postaju neka vrsta "zlatnog standarda". Većina profesionalaca suočeni s njim gotovo svaki dan i ne mogu zamisliti bez konačnu dijagnozu. PCR često postaje jedina reakcija za identifikaciju aktivne faze bolesti u tim trenucima kada drugi ne uspiju bakteriološkog virološki, imunološke dijagnostičkih metoda.


Prednosti PCR dijagnostiku u modernoj medicini:

• izravno otkrivanje prisutnosti patogena (tj određenim područjima patogenih DNA ili RNA) u uzorku.
• visoka specifičnost može odrediti jedinstveni komad DNA ili RNA specifične za patogena, što eliminira mogućnost lažno reakcije.
• Visoka osjetljivost PCR omogućuje otkrivanje čak i pojedinih stanica patogena (virusa, bakterija). Osjetljivost PCR analize je 10 - 1000 stanica u uzorku (npr osjetljivosti imunološke i mikroskopskih ispitivanja - samo 103-105 stanice).

• Razvoj univerzalnog PCR metoda za otkrivanje različitih patogena. Predmet istraživanja za PCR je genetski materijal (DNA, RNA) parazita. Tehnika se može otkriti više patogena iz biološkog uzorka.
• Vrlo su brzi rezultati ispitivanja. Cijeli istraživanje provedeno za 4-4,5 sata, barem - neki više.
• Sposobnost prepoznavanja patogena do pojave simptoma (pretklinička dijagnoza), a nakon prošlih bolesti (retrospektivna dijagnoze). Primjeri pretklinička dijagnoza bit će ispitan u razdoblju inkubacije (od trenutka zaraze do pacijenta pritužbi) i latentne infekcije (kada nema simptoma na sve, ali postoji laboratorij dokazi - PCR, na primjer). Jedan od vrhunaca je PCR dijagnostiku PCR u arhivskog materijala ili bioloških ostataka važne za identifikaciju ili očinstva.

Trenutno PCR dijagnostika znatno razvoj. Postoji poboljšanje metoda, vrijeme i opet, tu su nove vrste PCR, medicinski tržište ulaze novi ispitni sustav za ove reakcije. Ovaj trošak-PCR proučava svake godine postaje dostupna širokom rasponu pacijenata.

Što se temelji PCR

Temelj lančanoj reakciji polimeraze (pojačanje udvostručiti ponavlja) pojedinih dijelova DNA ili RNA enzima u laboratoriju. Rezultat je količina DNA ili RNA koja je dovoljna za vizualne analize. Studija se kopira samo dio koji odgovara specifičnim uvjetima, a samo u prisustvu svog stanja u promatranom uzorku.

Na primjer, materijal za istraživanja, koji predviđa prisutnost fragmenata DNA ili RNA patogena (sline, krvi, urina, iscjedak iz spolovila), smješteni u posebnom reaktoru (Thermocyclers). Pored toga se doda specifična enzime koji se vežu za patogenu DNA ili RNA, te sintezu kopija. Ovaj primjerak je nekoliko koraka upišete "lančanu reakciju", a završiti s jednom kopijom genetskog materijala može proizvesti stotine ili tisuće primjeraka. Tada dolazi analizu i usporedbu rezultata s dostupnim baze podataka o strukturi različitih patogena. Pomoću PCR ne samo da može identificirati vrstu patogena, ali i dati kvantitativnu rezultat analize, odnosno onoliko patogeni u ljudi.

PCR se sada širi raspon mogućnosti studija: uvođenje mutacija, fuzije DNA fragmenata i raširena u medicini, primjerice, utvrditi očinstvo, pojavu novih gena i još mnogo toga.

Što se infekcija može biti otkriven PCR dijagnostika

1) HIV (može otkriti HIV virus humane imunodeficijencije-1)
2) Virusni hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, HCV RNA, RNA-HGV)
3) Infektivna mononukleoza (DNK virusa Epstein-Barrov -VEB)
4) Tsytomehalovyrusnaya infekcije (DNK-CMV)

5) herpesne infekcije (herpes simplex virus DNA HSV 1 i 2)
6) spolno prenosivih bolesti (infekcije, spolno prenosive infekcije) - ureaplasmosis, gardnerellez, klamidija, mikoplazmoza, Trihomonijaza,
7) Tuberkuloza (Mycobacterium tuberculosis)
8) onkogenim virusima - virusom (humani papiloma virus (uključujući njegove onkogenih tipova 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, i 59)
9) borelioza, krpeljnog encefalitisa
10) listerioze
11) Kandidijaza (gljivica roda Candida)
12) pylori infekcije (Helicobacter pylori)

i druge

S obzirom raspon patogena PCR dijagnostika je naširoko koristi u ginekološkoj, mokraćnog prakse, prakse, zarazne bolesti, u pulmologiju, tuberkuloze, gastroenterologije, hematologiju, onkologiju i drugima.

Materijal za studije i pravilima ograde

Materijal za istraživanje PCR koji može otkriti stranih DNA bakterija ili DNA ili RNA može služiti raznim biološkim tekućinama i prava okoliša: sluzi, urin, krv, sputum, strugotina epitelne stanice, tkiva posteljice, krv, sok prostate, amnionske tekućine, pleuralni tekućine.

Ispit za infekcije, spolno prenosive infekcije (SPI) između muškaraca i žena uspon iscjedak iz spolovila vatom ili struganje iz maternice, struganje ili obrisak uretre (mokraćne cijevi), urina.

Ispit za infekcije (herpes infekcije, CMV, mononukleoza, toksoplazmoza, hepatitis B i C, HIV infekcija) PCR test na krv uzeta.

Za dijagnozu infektivne mononukleoze, CMV, herpes infekcija brisa grla uzima za testiranje za CMV - urina. Često za istraživanja na živčani sustav u brojnim studijama poduzetih cerebrospinalne tekućine.

U pulmologiju materijala ispljuvak, pleuralni tekućine.

Ispit za intrauterine infekcije - amnionske tekućine, tkiva posteljice.

Priprema za depozitne materijala i PCR dijagnostika

Gotovo svi pacijenti koji su izveli PCR dijagnostiku, računati na pouzdane, točne i brze rezultate, koji u velikoj mjeri ovisi o sposobnosti laboratorija, laboratorijske profesionalnih liječnika. Međutim, mnogi ne misle da je to kredibilitet velikoj mjeri ovisi o nama, a to su preporuke liječnika, načina života i precizno prikupljanje materijala. U zbirci materijalnih uvjeta potrebnih da se isključuju zagađenje (onečišćenja) materijala i, dakle, sumnjati u objektivnost analize.

Pravilna priprema za isporuku materijala ne predstavlja mnogo poteškoća. Sljedeće preporuke liječnika za pacijente:

1) su seksualno aktivni i danju za isporuku materijala;
2) na studij u krvi pojavljuje u jutro na prazan želudac (ne jesti, piti);
3) za vrijeme urina prikupljeni u jutarnjim dijelu prvog čiste sterilni spremnik.

Uvjeti spremnost PCR analiza

Konačni rezultat je spreman u 1,5-2h dana nakon dostave materijala. U nekim slučajevima, rezultat je spremna prvog dana.

Objašnjenje PCR

Negativan PCR rezultat pokazuje da je ispitni materijal u trenutku isporuke nije pronađen nikakav trag infektivnih agenata. Većina slučajeva ne pokazuje infekcije, što je pokušao pronaći u studijskom uzorku.

Pozitivan PCR ukazuje otkriti znakove infekcije u proučavanju biološkog uzorka. S velikom preciznošću pozitivan rezultat ukazuje na prisutnost infekcije u bilo kojem trenutku.

Postoje situacije u kojima PCR detektirana pozitivno za aktivne infekcije i ne može govoriti - takozvani "zdravi prijevoznika" s bez kliničkih simptoma bolesti koji ne zahtijevaju liječenje, ali zahtijeva praćenje od strane liječnika. Postoji više u nizu virusnih infekcija (HPV, CMV, EBV infekcije, herpes infekcije, itd) u materijalima, kao što su, sline struganje maternice, uretre, odnosno lokalnoj fokus. No, ne smijemo zaboraviti da je prijenos medija dostupnih zdravih ljudi kao prijelaz na kronični oblik bolesti s procesom aktivacije. Ako PCR pozitivne krvi, nije nosač i zahtijeva posebnu obradu.

Kvantitativni PCR ocjenjuje od strane liječnika pojedinačno za određenu infekcije odvojeno i ne dijeli prijelaze. Na temelju kvantitativne PCR liječnik može utvrditi stupanj aktivnosti infekcije i postaviti pozornicu bolesti, koja je sasvim sigurno utjecati na tijek i namjera doze lijekova.

Jedan od najnovijih uzbudljivih pitanja: kako se točna dijagnoza PCR?

Za PCR analizu, postoje 3 definicije:

1. Točnost (s velikom vjerojatnošću može utvrditi ili odsutnost zaraze).

2. specifičnost (točnost detekcije određenog infekcije).
3. Osjetljivost (čak i pri niskim sadržajem genetskog materijala patogena u uzorku detektira infekcije).

Lančana reakcija polimeraze praktički ne daje neistinit (tj nema pozitivnih testova u kojima nema infekcije). Lažno negativni rezultati su rijetki (često je to zbog nedostatka aktivne infekcije u ljudi u ovom trenutku). Na primjer, latentna infekcija, kronična infekcija izvan aktivnosti.